UFC5010BK Merck Millipore 超濾管 0.5ml 10KD 用戶指南

——高效生物分子濃縮與純化的實驗室利器

一、產品概述

UFC5010BK 是默克密理博（Merck Millipore）旗下 Amicon® Ultra 系列超濾離心管，專為生物分子（如蛋白質、核酸、抗體等）的濃縮、脫鹽及緩沖液置換設計。該產品采用 10,000 Dalton 分子量截留（MWCO） 的再生纖維素膜（Ultracel®-10），結合垂直濾膜與反向旋轉回收技術，可實現 90%以上樣品回收率 和 25–30倍濃縮系數，適用于 HPLC 前處理、蛋白純化及臨床樣本分析等場景。

二、技術規格

• 膜材質：Ultracel®再生纖維素

• 截留分子量（MWCO）：10,000 Dalton

• 樣品容量：0.5 mL（最大起始體積）

• 濃縮后體積：15–20 μL（典型值）

• 離心條件：

• 濃縮：14,000 × g（最大），推薦 7,500–10,000 × g

• 回收：1,000 × g（反向旋轉）

• 化學兼容性：pH 1–9，兼容 SDS、Tris-HCl、尿素等緩沖體系

• 無菌性：非無菌，一次性使用

• 存儲條件：15–30°C，保質期 3 年

三、核心優勢

1. 高效濃縮

• 垂直濾膜設計減少濃差極化，避免濾膜堵塞，處理時間僅需 10–30分鐘。

• 示例：0.25 mg/mL 細胞色素 c（12.4 kDa）濃縮后回收率 >95%。

2. 高回收率

• 低吸附濾膜與聚丙烯外殼結合，實現 >90% 樣品回收率（稀釋起始溶液）。

• 反向旋轉功能確保濃縮物回收，避免吸量誤差。

3. 靈活應用

• 支持蛋白、核酸、抗體等生物分子的濃縮與純化。

• 可用于去除引物、連接子或標記反應中的高分子雜質。

四、操作流程

（一）預處理

1. 潤洗：

• 新管使用前，加入超純水至膜上方，冰浴或 4°C 預冷 5 分鐘，倒出液體。

• 重復 1 次，確保膜潤濕。

2. 平衡：

• 將超濾管插入 1.5 mL 離心管中，使用相同型號空管進行離心平衡。

（二）加樣

1. 樣品量：

• 加入體積不超過管頂白線（通常 ≤500 μL）。

• 示例：0.5 mL 1 mg/mL BSA 溶液。

2. 離心：

• 4°C 預冷離心機，設置轉速 ≤10,000 × g，離心 15–30 分鐘。

• 示例參數：7,500 × g、25 分鐘（10,000 MWCO 膜濃縮 0.25 mg/mL 細胞色素 c）。

（三）濃縮與回收

1. 濃縮判斷：

• 當濾液體積接近 1 mL 時，取 50 μL 緩沖液 +10 μL 濾液，通過 Bradford 法或電泳檢測蛋白泄漏。

2. 緩沖液置換：

• 濃縮至 1 mL 后，加入等體積新緩沖液（經 0.22 μm 過濾），重復離心 3 次。

3. 終體積調整：

• 根據需求，將樣品濃縮至 ≤50 μL（如需更高濃度，可降低轉速至說明書推薦值以下）。

4. 反向旋轉回收：

• 離心結束后，將超濾管倒置，1,000 × g 離心 1–2 分鐘，回收濃縮液。

（四）清洗與保存

1. 清洗：

• 使用后，用超純水沖洗 3 次，再用 75% 乙醇沖洗 1 次。

• 殘留水可通過 1,000 × g 離心 1 分鐘去除。

2. 保存：

• 干燥后置于 4°C 或 -20°C 保存，避免膜干燥開裂。

五、應用案例

1. 蛋白質濃縮

• 使用 UFC5010BK 將 1 mL 0.5 mg/mL BSA 濃縮至 100 μL，回收率 92%（7,500 × g、10 分鐘）。

2. 核酸脫鹽

• 0.5 mL 50 ng/μL DNA 溶液經 3 次緩沖液置換，鹽濃度從 150 mM 降至 10 mM 以下。

3. 抗體純化

• 從組織培養基中濃縮抗體，結合 UFC5010BK 與蛋白 A 親和柱，實現抗體純化與脫鹽同步進行。

六、質量控制與驗證

1. 批次一致性：

• MWCO 驗證（電泳法）

• 回收率測試（BSA/DNA 標準品）

• 膜完整性檢測（氣泡壓力法）

• 每批次提供 CoA（Certificate of Analysis），包含：

2. 性能驗證：

• 重復性測試（n=10）：BSA 回收率 CV ≤3%，DNA 濃縮時間 CV ≤5%。

七、注意事項

1. 操作安全：

• 避免膜干燥，潤濕后保持濕潤狀態直至使用結束。

• 離心時確保轉子平衡，防止離心機損壞。

2. 樣品兼容性：

• 高粘度樣品（如甘油）需稀釋后使用。

• 強酸/強堿溶液可能腐蝕再生纖維素膜，需預實驗驗證。

3. 離心條件：

• 離心時間過長可能導致蛋白沉淀，建議分步離心并監測濾液狀態。