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Thermo life 10099141--Thermo AUSTRALIAN ORIGIN 澳洲胎牛血清

更新時(shí)間:2025-05-26      點(diǎn)擊次數(shù):414
Thermo life 10099141--Thermo AUSTRALIAN ORIGIN 澳洲胎牛血清用戶指南
產(chǎn)品概述
Thermo life 10099141--Thermo AUSTRALIAN ORIGIN 澳洲胎牛血清是 Thermo Fisher Scientific 公司推出的高品質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)添加物,源自澳大利亞未接觸傳染病源的健康胎牛。每瓶血清容量為 500 mL,經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的采集、處理與檢測(cè)流程,旨在為細(xì)胞培養(yǎng)提供豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和穩(wěn)定的生長(zhǎng)環(huán)境,廣泛適用于各類細(xì)胞系的培養(yǎng)、原代細(xì)胞培養(yǎng)以及干細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景,是科研人員開(kāi)展細(xì)胞生物學(xué)研究的重要基礎(chǔ)試劑。
技術(shù)原理
胎牛血清之所以能為細(xì)胞生長(zhǎng)提供支持,源于其復(fù)雜且的成分。血清中含有多種關(guān)鍵物質(zhì):
  1. 營(yíng)養(yǎng)物質(zhì):包含氨基酸、維生素、葡萄糖等細(xì)胞生長(zhǎng)所必需的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)成分 。氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的原料;維生素參與細(xì)胞內(nèi)眾多的代謝反應(yīng);葡萄糖則為細(xì)胞提供能量,這些物質(zhì)共同滿足細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂和代謝的需求。

  1. 生長(zhǎng)因子:如表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)等 。這些生長(zhǎng)因子能夠與細(xì)胞表面的特異性受體結(jié)合,激活細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)傳導(dǎo)通路,促進(jìn)細(xì)胞的增殖、分化和存活。例如,EGF 可刺激上皮細(xì)胞的生長(zhǎng)和分化,在皮膚細(xì)胞培養(yǎng)等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮重要作用。

  1. 結(jié)合蛋白:像轉(zhuǎn)鐵蛋白可結(jié)合并轉(zhuǎn)運(yùn)鐵離子,為細(xì)胞提供鐵元素,同時(shí)防止鐵離子在溶液中產(chǎn)生自由基對(duì)細(xì)胞造成損傷;白蛋白能夠結(jié)合和運(yùn)輸脂肪酸、激素等物質(zhì),維持細(xì)胞外環(huán)境的穩(wěn)定 。

  1. 緩沖物質(zhì)與 pH 調(diào)節(jié)劑:血清中的碳酸氫鹽、蛋白質(zhì)等成分構(gòu)成緩沖體系,可維持細(xì)胞培養(yǎng)液的 pH 穩(wěn)定在 7.2 - 7.4 的適宜范圍,為細(xì)胞創(chuàng)造穩(wěn)定的酸堿環(huán)境 。

當(dāng)將胎牛血清添加到細(xì)胞培養(yǎng)液中時(shí),這些成分協(xié)同作用,模擬細(xì)胞在體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境,為細(xì)胞提供必要的營(yíng)養(yǎng)和信號(hào),促進(jìn)細(xì)胞貼壁、生長(zhǎng)和代謝,保障細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的順利進(jìn)行。
產(chǎn)品特點(diǎn)
  1. 高品質(zhì)來(lái)源:血清取自澳大利亞特定區(qū)域的健康胎牛,該地區(qū)具有嚴(yán)格的動(dòng)物健康監(jiān)管體系,有效避免了瘋牛病(BSE)、口蹄疫等重大傳染病源的污染,從源頭上保證了血清的安全性和高品質(zhì) 。

  1. 嚴(yán)格的質(zhì)量控制

  • 微生物檢測(cè):每一批次血清均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的細(xì)菌、真菌、支原體和病毒檢測(cè) 。采用靈敏度高的檢測(cè)方法,如培養(yǎng)法、PCR 法等,確保血清無(wú)微生物污染,避免微生物對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成干擾,甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

  • 內(nèi)毒素檢測(cè):通過(guò)鱟試劑法(LAL 法)精確測(cè)定血清中的內(nèi)毒素含量,每批血清內(nèi)毒素水平低于 0.06 EU/mL,遠(yuǎn)低于行業(yè)標(biāo)準(zhǔn),減少內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不良影響 。

  • 細(xì)胞培養(yǎng)性能測(cè)試:使用多種不同類型的細(xì)胞系(如 HeLa 細(xì)胞、CHO 細(xì)胞等)對(duì)血清進(jìn)行培養(yǎng)性能測(cè)試,評(píng)估細(xì)胞的生長(zhǎng)速率、形態(tài)、存活率等指標(biāo),確保血清能夠?yàn)榧?xì)胞提供良好的生長(zhǎng)支持 。

  1. 穩(wěn)定的批次間一致性:Thermo Fisher Scientific 采用標(biāo)準(zhǔn)化的生產(chǎn)流程和先進(jìn)的質(zhì)量控制體系,從血清采集、加工處理到最終檢測(cè),每一個(gè)環(huán)節(jié)都嚴(yán)格把控 。通過(guò)對(duì)關(guān)鍵指標(biāo)的嚴(yán)格監(jiān)測(cè)和調(diào)控,保證不同批次的血清在成分和性能上具有高度一致性,科研人員在進(jìn)行長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)或重復(fù)性實(shí)驗(yàn)時(shí),無(wú)需擔(dān)心因血清批次差異導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定的問(wèn)題。

  1. 廣泛的適用性:適用于多種細(xì)胞類型的培養(yǎng),無(wú)論是常規(guī)的細(xì)胞系,還是培養(yǎng)難度較高的原代細(xì)胞、胚胎干細(xì)胞等,都能提供良好的營(yíng)養(yǎng)支持 。并且可與多種基礎(chǔ)培養(yǎng)基(如 DMEM、RPMI 1640 等)配合使用,滿足不同科研實(shí)驗(yàn)的需求。

  1. 便捷的使用方式:產(chǎn)品以 500 mL 瓶裝形式提供,包裝規(guī)格符合實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用需求。血清經(jīng)過(guò) γ 射線輻照處理,在不影響血清成分和性能的前提下,有效殺滅潛在的微生物,用戶無(wú)需進(jìn)行額外的滅菌處理,可直接按照實(shí)驗(yàn)需求進(jìn)行稀釋和使用,操作便捷高效 。

使用方法
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
  1. 血清檢查:收到血清后,立即檢查包裝是否完好,標(biāo)簽信息是否清晰準(zhǔn)確,包括產(chǎn)品名稱、貨號(hào)、規(guī)格、批號(hào)、有效期、儲(chǔ)存條件等 。將血清短暫離心(低速,如 1000 - 2000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),使附著在瓶蓋上的血清集中于瓶底,避免損失。同時(shí),觀察血清外觀,正常情況下應(yīng)為淺黃色或琥珀色、澄清且無(wú)沉淀或渾濁現(xiàn)象。若發(fā)現(xiàn)血清顏色異常、有明顯沉淀或異味,請(qǐng)勿使用,并及時(shí)聯(lián)系供應(yīng)商處理。

  1. 培養(yǎng)基配制:根據(jù)所培養(yǎng)細(xì)胞的類型和實(shí)驗(yàn)需求,選擇合適的基礎(chǔ)培養(yǎng)基 。在無(wú)菌環(huán)境下(如超凈工作臺(tái)),按照培養(yǎng)基說(shuō)明書的要求,將基礎(chǔ)培養(yǎng)基粉末溶解于適量的超純水中,充分?jǐn)嚢柚寥芙狻H缓螅鶕?jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),添加相應(yīng)的添加劑(如谷氨酰胺、丙酮酸鈉等)。最后,按照一定比例(通常為 5% - 20%,具體比例需根據(jù)細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)要求確定)加入胎牛血清,用無(wú)菌的移液管或注射器將血清緩慢加入培養(yǎng)基中,輕輕搖勻,使血清與培養(yǎng)基充分混合 。配制好的培養(yǎng)基應(yīng)盡快使用,如需保存,可置于 2 - 8℃冰箱中,但保存時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng),以免影響培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分和性能。

  1. 細(xì)胞培養(yǎng)耗材準(zhǔn)備:準(zhǔn)備好無(wú)菌的細(xì)胞培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、移液管、槍頭、離心管等耗材 。確保所有耗材均經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的滅菌處理,可通過(guò)高壓蒸汽滅菌或購(gòu)買預(yù)滅菌的一次性耗材。在使用前,檢查耗材的包裝是否完好,避免污染。

細(xì)胞培養(yǎng)操作步驟
  1. 細(xì)胞復(fù)蘇(若為凍存細(xì)胞):從液氮罐中取出凍存的細(xì)胞,迅速放入 37℃水浴鍋中,輕輕搖晃,使細(xì)胞在 1 - 2 分鐘內(nèi)快速解凍 。將解凍后的細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管中,加入適量的含血清培養(yǎng)基,輕輕吹打混勻,然后以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液,去除凍存保護(hù)劑。向離心管中加入適量的新鮮配制的含血清培養(yǎng)基,輕輕吹打,使細(xì)胞均勻分散,制成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液接種到細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,補(bǔ)充適量的培養(yǎng)基,使細(xì)胞密度達(dá)到合適范圍(根據(jù)細(xì)胞類型而定),然后將細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中,在適宜的溫度(一般為 37℃)、濕度(95%)和氣體環(huán)境(5% CO?)下培養(yǎng) 。

  1. 細(xì)胞傳代:當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到 80% - 90% 匯合度時(shí),需要進(jìn)行傳代培養(yǎng) 。首先,棄去細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊培養(yǎng)基,用無(wú)菌的 PBS 緩沖液輕輕沖洗細(xì)胞 1 - 2 次,去除殘留的培養(yǎng)基和代謝產(chǎn)物。然后,加入適量的胰蛋白酶 - EDTA 消化液(根據(jù)培養(yǎng)瓶大小而定),輕輕搖晃培養(yǎng)瓶,使消化液均勻覆蓋細(xì)胞表面,在 37℃培養(yǎng)箱中孵育 1 - 3 分鐘,觀察細(xì)胞形態(tài)變化,當(dāng)細(xì)胞變圓、部分細(xì)胞開(kāi)始脫落時(shí),立即加入含血清培養(yǎng)基終止消化(血清中的蛋白可中和胰蛋白酶活性) 。用無(wú)菌的移液管輕輕吹打細(xì)胞,使細(xì)胞脫離培養(yǎng)瓶壁,形成細(xì)胞懸液。將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至無(wú)菌離心管中,以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液。根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,將細(xì)胞重新接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中,補(bǔ)充適量的含血清培養(yǎng)基,放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 。

  1. 細(xì)胞凍存:當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好且數(shù)量足夠時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存,以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用 。首先,將細(xì)胞按照上述傳代步驟消化并制成細(xì)胞懸液,然后以低速離心(如 800 - 1000 rpm,離心 3 - 5 分鐘),棄去上清液。向細(xì)胞沉淀中加入適量的細(xì)胞凍存液(通常為含 10% DMSO、90% 胎牛血清的培養(yǎng)基),輕輕吹打,使細(xì)胞均勻分散于凍存液中 。將細(xì)胞懸液分裝到無(wú)菌的凍存管中,每管體積一般為 1 - 2 mL,并做好標(biāo)記(注明細(xì)胞名稱、凍存日期、批號(hào)等信息) 。將凍存管放入程序降溫盒中,置于 - 80℃冰箱中過(guò)夜,然后轉(zhuǎn)移至液氮罐中長(zhǎng)期保存 。

實(shí)驗(yàn)后處理
  1. 血清保存:未開(kāi)封的血清應(yīng)儲(chǔ)存于 - 20℃冰箱中,可保存 5 年 。避免反復(fù)凍融,因?yàn)閮鋈谶^(guò)程會(huì)破壞血清中的蛋白結(jié)構(gòu),影響血清性能。若血清需多次使用,可在開(kāi)封后將其分裝成小份(根據(jù)每次使用量確定分裝體積),密封好后放入 - 20℃冰箱冷凍保存,每次使用時(shí)取出一份,避免整瓶血清多次凍融 。已開(kāi)封的血清,若短時(shí)間內(nèi)使用(1 - 2 周),可儲(chǔ)存于 2 - 8℃冰箱;若長(zhǎng)時(shí)間不用,仍需分裝后冷凍保存 。

  1. 廢棄物處理:實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)生的廢棄血清、培養(yǎng)基以及含有細(xì)胞的液體等,應(yīng)按照實(shí)驗(yàn)室生物安全和化學(xué)廢棄物處理規(guī)定進(jìn)行分類處理 。對(duì)于含有生物活性物質(zhì)的廢棄物,需進(jìn)行高壓滅菌或化學(xué)消毒處理后,再進(jìn)行丟棄,防止污染環(huán)境和傳播生物危害 。

注意事項(xiàng)
  1. 血清儲(chǔ)存與解凍

  • 嚴(yán)格按照規(guī)定的溫度儲(chǔ)存血清,避免因儲(chǔ)存溫度不當(dāng)導(dǎo)致血清變質(zhì)。從 - 20℃冰箱中取出血清進(jìn)行解凍時(shí),應(yīng)將血清置于 2 - 8℃冰箱中緩慢解凍,或采用水浴解凍的方式,但水浴溫度不得超過(guò) 37℃,且解凍過(guò)程中需不斷輕輕搖晃血清瓶,使血清均勻解凍 。避免將血清暴露在高溫環(huán)境下快速解凍,以免引起血清中蛋白沉淀和活性降低。

  • 解凍后的血清應(yīng)盡快使用,若不能立即使用,應(yīng)儲(chǔ)存于 2 - 8℃冰箱中,并在一周內(nèi)用完。若血清出現(xiàn)渾濁或沉淀,可通過(guò)低速離心(如 1000 - 2000 rpm,離心 5 - 10 分鐘)去除沉淀后使用,但需注意沉淀可能會(huì)影響血清的部分性能 。

  1. 細(xì)胞培養(yǎng)操作

  • 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中,要嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)范,在超凈工作臺(tái)中進(jìn)行所有操作,使用前需對(duì)超凈工作臺(tái)進(jìn)行紫外消毒和風(fēng)機(jī)預(yù)吹處理 。操作時(shí)應(yīng)佩戴口罩、手套,避免交叉污染。每次使用完移液管、槍頭等耗材后,應(yīng)及時(shí)丟棄,不得重復(fù)使用。

  • 不同類型的細(xì)胞對(duì)血清的需求和耐受性不同,在進(jìn)行新的細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)前,建議進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn),摸索最佳的血清添加比例和培養(yǎng)條件 。同時(shí),注意觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài),如細(xì)胞形態(tài)、增殖速度、存活率等,根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)及時(shí)調(diào)整培養(yǎng)條件。

  • 在更換培養(yǎng)基時(shí),盡量減少細(xì)胞暴露在空氣中的時(shí)間,避免培養(yǎng)基干涸和細(xì)胞脫水。更換培養(yǎng)基的頻率應(yīng)根據(jù)細(xì)胞的生長(zhǎng)速度和代謝情況而定,一般為 1 - 2 天更換一次,以保證細(xì)胞能夠獲得充足的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和良好的生長(zhǎng)環(huán)境 。

  1. 安全防護(hù):血清中可能含有未知的生物活性物質(zhì),雖然經(jīng)過(guò)嚴(yán)格檢測(cè),但在操作過(guò)程中仍需注意個(gè)人防護(hù) 。避免血清接觸皮膚和眼睛,如不慎接觸,應(yīng)立即用大量清水沖洗,并根據(jù)情況就醫(yī)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,及時(shí)清洗實(shí)驗(yàn)器材和操作臺(tái),保持實(shí)驗(yàn)室環(huán)境整潔安全 。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法
  1. 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢或不生長(zhǎng)

  • 原因:可能是血清添加比例不合適、血清質(zhì)量不佳、培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)成分不足、細(xì)胞污染或培養(yǎng)條件不適宜等 。

  • 解決方法:嘗試調(diào)整血清添加比例,增加或減少血清用量,觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況;檢查血清的批號(hào)和質(zhì)量檢測(cè)報(bào)告,確認(rèn)血清是否合格,必要時(shí)更換新批次的血清;檢查培養(yǎng)基的配制是否正確,是否添加了足夠的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì);對(duì)細(xì)胞進(jìn)行微生物污染檢測(cè),如支原體檢測(cè)等,若發(fā)現(xiàn)污染,及時(shí)采取措施處理;優(yōu)化培養(yǎng)條件,如調(diào)整溫度、CO?濃度、濕度等,確保細(xì)胞處于適宜的生長(zhǎng)環(huán)境 。

  1. 細(xì)胞出現(xiàn)大量死亡

  • 原因:可能是血清中含有毒素或有害物質(zhì)、細(xì)胞受到微生物污染、消化過(guò)度、培養(yǎng)環(huán)境突然改變等 。

  • 解決方法:檢測(cè)血清中的內(nèi)毒素含量和其他有害物質(zhì),若血清存在問(wèn)題,更換新的血清;對(duì)細(xì)胞和培養(yǎng)環(huán)境進(jìn)行微生物檢測(cè),找出污染源并進(jìn)行處理;優(yōu)化細(xì)胞消化步驟,控制消化時(shí)間和消化液濃度,避免消化過(guò)度;在更換培養(yǎng)基、轉(zhuǎn)移細(xì)胞等操作時(shí),盡量保持培養(yǎng)環(huán)境的穩(wěn)定,減少對(duì)細(xì)胞的刺激 。

  1. 培養(yǎng)基出現(xiàn)渾濁

  • 原因:可能是培養(yǎng)基受到微生物污染、血清中存在雜質(zhì)或沉淀、細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累過(guò)多等 。

  • 解決方法:對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行微生物培養(yǎng)檢測(cè),確定是否污染,若污染,丟棄污染的培養(yǎng)基,并對(duì)培養(yǎng)設(shè)備和環(huán)境進(jìn)行消毒;將血清進(jìn)行低速離心,去除沉淀后再使用;增加培養(yǎng)基更換頻率,及時(shí)清除細(xì)胞代謝產(chǎn)物,保持培養(yǎng)基的清潔 。



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