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蛋白快速染色液 1900500 的典型應(yīng)用案例

更新時(shí)間：2025-09-10 點(diǎn)擊次數(shù)：127

（一）重組蛋白表達(dá)純化后的純度鑒定

某生物實(shí)驗(yàn)室開展重組人干擾素 -α（rhIFN-α，分子量 20 kDa）的表達(dá)純化研究，使用蛋白快速染色液 1900500 對(duì)純化產(chǎn)物進(jìn)行純度鑒定：

電泳操作：將 Ni-NTA 親和純化后的 rhIFN-α 樣本（20 μg）與 5×SDS 上樣緩沖液混合，95℃變性 5 分鐘后，上樣至 12% SDS-PAGE 凝膠，恒壓 120 V 電泳 90 分鐘。

染色檢測(cè)：電泳結(jié)束后，將凝膠放入蛋白快速染色液 1900500 中，室溫振蕩染色 20 分鐘，無需脫色，直接使用凝膠成像系統(tǒng)（Bio-Rad ChemiDoc）掃描成像。

結(jié)果分析：成像結(jié)果顯示，rhIFN-α 在 20 kDa 處呈現(xiàn)單一清晰條帶，無雜蛋白條帶（純度＞98%），與 HPLC 檢測(cè)結(jié)果（純度 98.5%）一致性達(dá) 99%。對(duì)比傳統(tǒng)考馬斯亮藍(lán)染色，該染色液不僅將實(shí)驗(yàn)時(shí)間從 4 小時(shí)縮短至 20 分鐘，還避免了脫色過程中 rhIFN-α 的微量損失（傳統(tǒng)染色后蛋白回收率為 92%，該染色液回收率達(dá) 98%）。

（二）蛋白質(zhì)組學(xué)中的差異蛋白篩選

某科研團(tuán)隊(duì)開展肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞的蛋白質(zhì)組學(xué)差異研究，使用蛋白快速染色液 1900500 對(duì)雙向電泳（2-DE）凝膠進(jìn)行染色，篩選差異表達(dá)蛋白：

雙向電泳操作：提取肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞的總蛋白（各 100 μg），通過等電聚焦（IEF，pH 3-10）進(jìn)行第一向分離，再經(jīng) 12% SDS-PAGE 進(jìn)行第二向分離，獲得 2-DE 凝膠。

快速染色與成像：將 2-DE 凝膠放入蛋白快速染色液 1900500 中，室溫振蕩染色 25 分鐘，直接使用激光掃描成像系統(tǒng)（GE Typhoon FLA 9500）獲取蛋白圖譜。

差異分析：通過 ImageMaster 2D Platinum 軟件分析，在肝癌細(xì)胞與正常肝細(xì)胞的蛋白圖譜中，共識(shí)別出 45 個(gè)差異表達(dá)蛋白（上調(diào) 28 個(gè)，下調(diào) 17 個(gè)），其中分子量 15 kDa 的熱休克蛋白 β1（HSPB1）在肝癌細(xì)胞中表達(dá)量是正常細(xì)胞的 3.2 倍。后續(xù)通過質(zhì)譜鑒定與 Western Blot 驗(yàn)證，確認(rèn) HSPB1 為肝癌潛在標(biāo)志物。該案例中，蛋白快速染色液 1900500 的免脫色特性避免了 2-DE 凝膠中低豐度差異蛋白的損失，且快速染色效率確保了高通量樣本（30 塊凝膠 / 周）的及時(shí)分析。

（三）生物標(biāo)志物篩選中的高效應(yīng)用

在尋找新型心血管疾病生物標(biāo)志物的研究中，科研人員采集了 100 例冠心病患者和 100 例健康對(duì)照者的血漿樣本。首先，利用超速離心結(jié)合免疫沉淀技術(shù)富集血漿中的潛在生物標(biāo)志物蛋白。隨后，將富集后的蛋白樣品進(jìn)行 10% SDS - PAGE 電泳分離。電泳結(jié)束后，把凝膠置于蛋白快速染色液 1900500 中，在室溫條件下溫和振蕩染色 18 分鐘。通過凝膠成像系統(tǒng)分析，研究人員清晰地觀察到在相對(duì)分子量 35 kDa 和 50 kDa 附近，冠心病患者血漿樣本中出現(xiàn)了特異性條帶，而健康對(duì)照組中這些條帶則較為微弱或缺失。進(jìn)一步對(duì)這些差異條帶進(jìn)行質(zhì)譜分析，成功鑒定出兩種與冠心病發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)的蛋白，分別為載脂蛋白 A - IV 變異體和金屬硫蛋白 - 3。與傳統(tǒng)染色方法相比，使用蛋白快速染色液 1900500 將整個(gè)染色及分析周期從原本的至少 6 小時(shí)縮短至 1 小時(shí)以內(nèi)，大大提高了生物標(biāo)志物篩選的效率，且由于無需脫色，有效避免了低豐度生物標(biāo)志物蛋白的丟失，提升了篩選的準(zhǔn)確性。

（四）抗體藥物研發(fā)中的質(zhì)量控制

一家專注于抗體藥物研發(fā)的生物制藥公司，在開發(fā)一款針對(duì)腫瘤壞死因子（TNF）的單克隆抗體藥物時(shí)，運(yùn)用蛋白快速染色液 1900500 對(duì)抗體純化過程中的各個(gè)階段產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)量檢測(cè)。在抗體的親和層析純化后，取適量純化產(chǎn)物與上樣緩沖液混合，進(jìn)行 12% Native - PAGE 電泳，以分析抗體的聚集狀態(tài)和純度。電泳完成后，將凝膠直接放入蛋白快速染色液 1900500 中，15 分鐘后，在凝膠成像儀下觀察到清晰的單一條帶，表明抗體純度較高，無明顯聚集現(xiàn)象。在后續(xù)的穩(wěn)定性研究中，對(duì)不同儲(chǔ)存條件下的抗體樣本進(jìn)行定期檢測(cè)，同樣利用該染色液進(jìn)行快速染色分析。結(jié)果顯示，在 4℃儲(chǔ)存 3 個(gè)月后，抗體依然保持單一的條帶形態(tài)，而在 37℃加速老化條件下儲(chǔ)存 1 個(gè)月后，出現(xiàn)了少量低分子量的降解條帶。這種快速、免脫色的染色方式，使研發(fā)人員能夠快速判斷抗體藥物在不同階段的質(zhì)量狀況，及時(shí)調(diào)整生產(chǎn)工藝和儲(chǔ)存條件，有效縮短了抗體藥物研發(fā)周期，降低了研發(fā)成本。

（五）植物蛋白研究中的便捷檢測(cè)

某農(nóng)業(yè)科研團(tuán)隊(duì)致力于研究不同逆境脅迫下水稻葉片蛋白質(zhì)組的變化。在干旱脅迫處理 7 天后，提取水稻葉片總蛋白，采用 15% SDS - PAGE 凝膠電泳對(duì)蛋白進(jìn)行分離。電泳結(jié)束后，將凝膠浸入蛋白快速染色液 1900500 中，在搖床上緩慢振蕩染色 22 分鐘。染色完成后，清晰地觀察到在干旱脅迫組中，相對(duì)分子量約 28 kDa 的一種蛋白條帶強(qiáng)度明顯增強(qiáng)，而在對(duì)照組中該條帶較弱。經(jīng)后續(xù)的蛋白質(zhì)免疫印跡（Western Blot）驗(yàn)證，該蛋白為水稻中的一種干旱誘導(dǎo)蛋白（DIP - 28）。傳統(tǒng)染色方法不僅耗時(shí)久，而且在脫色過程中容易導(dǎo)致植物蛋白尤其是一些小分子防御蛋白的丟失，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。蛋白快速染色液 1900500 的應(yīng)用，使得植物蛋白研究中的染色檢測(cè)變得高效、便捷，能夠快速準(zhǔn)確地反映不同處理?xiàng)l件下植物蛋白表達(dá)的差異，為深入探究植物響應(yīng)逆境脅迫的分子機(jī)制提供了有力支持。

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